New Techs helautomatiska nukleinsyraextraktion och detektionsmaskin

Fem styrkor:
● Instrument konfigurerat med nukleinsyraextraktionen och det renade steget
● Instrument konfigurerat med ultraljudsextraktionsmodul
● Instrument konfigurerat med helautomatik
● Instrument konfigurerat med variabel temperaturförstärkning
● Instrument konfigurerat med helt sluten reagenssats

1. Behöver nukleinsyradetekteringsreagenser extraheras och renas?
Principen för nukleinsyradetektering är som följer: under inverkan av primer används DNA-polymeras för att utföra kedjereaktionsamplifiering på mall-DNA/RNA (kräver omvänd transkription av NA), och sedan detekteras mängden frigjord fluorescerande signal för att bestämma om provet innehåller nukleinsyran (DNA/RNA) från patogenen som ska detekteras.

1) Prover som inte har extraherats eller renats kan innehålla många komponenter som påverkar slutresultatet: nukleas (som kan lösa upp målnukleinsyran och orsaka falskt negativ), proteas (som kan minska DNA-polymeras och orsaka falskt negativ), tungmetall salt (vilket leder till inaktivering av syntas och orsakar falskt positivt ), för surt eller för alkaliskt PH (vilket kan göra att reaktionen misslyckas), ofullständigt RNA (som leder till falskt negativ omvänd transkriptionsfel).

2) Vissa prover är svåra att amplifiera direkt: Grampositiva och vissa parasiter, på grund av deras tjocka cellväggar och andra strukturer, om de inte går igenom nukleinsyraextraktionen och reningsprocessen, kan det extraktionsfria kitet misslyckas för sådana prover.

Därför rekommenderas det att välja testkit eller instrument som är konfigurerat med nukleinsyraextraktionssteget.

2. Kemisk extraktion eller fysisk ultraljudsfragmenteringsextraktion?
Generellt sett kan kemisk extraktion tillämpas på det mesta av förbehandlingen och reningen.Men i tjockväggiga grampositiva bakterier och vissa parasiter är det också så att kemisk extraktion inte kan erhålla effektiva nukleinsyramallar, vilket resulterar i falsk negativ detektion.Dessutom använder kemisk extraktion ofta starka medel, om elueringen inte är grundlig är det lätt att införa stark alkali i reaktionssystemet, vilket resulterar i felaktiga resultat.

Ultraljudsfragmentering använder fysisk krossning, som framgångsrikt har använts av GeneXpert, ett ledande företag inom POCT-området för mänskligt bruk, och har en absolut fördel vid nukleinsyraextraktion av vissa komplexa prover (som Mycobacterium tuberculosis).

Därför rekommenderas det att välja ett testkit eller ett instrument som är konfigurerat med ett nukleinsyraextraktionssteg.och det är optimalt om det finns en ultraljudsextraktionsmodul.

3. Manuell, halvautomatisk och helautomatisk?
Detta är ett problem med arbetskostnad och arbetseffektivitet.För närvarande är djursjukhus utan tillräckligt med personal, och nukleinsyraextraktion och detektion ett arbete som kräver viss kompetens och erfarenhet.Det råder ingen tvekan om att den helautomatiska nukleinsyraextraktions- och detektionsmaskinen är det perfekta valet.

4. Konstant temperaturförstärkning eller variabel temperaturförstärkning?
Amplifieringsreaktionen är en nukleinsyradetekteringslänk, och den professionella tekniken som är involverad i denna länk är komplex.Grovt sett används enzymer för att amplifiera nukleinsyran.I förstärkningsprocessen detekteras den förstärkta fluorescenssignalen eller den inbäddade fluorescenssignalen.Generellt sett gäller att ju tidigare fluorescenssignalen uppträder, desto större är målgeninnehållet i provet.

Konstant temperaturförstärkning är en nukleinsyraförstärkning vid en fast temperatur, medan amplifiering med variabel temperatur är en cyklisk förstärkning strikt enligt denaturering-annealing-förlängning.Den konstanta temperaturförstärkningstiden har utförts, medan den varierande temperaturförstärkningstiden i hög grad påverkas av hastigheten för temperaturökning och -fall hos instrumentet (för närvarande har många tillverkare kunnat göra 40 cykler av förstärkning på cirka 30 minuter).

Om laboratorieförhållandena är goda och zonindelningen är strikt, är det rimligt att säga att exakthetsskillnaden mellan de två inte kommer att vara stor.Emellertid kommer amplifiering med variabel temperatur att syntetisera fler nukleinsyraprodukter på en relativt kortare tid.För laboratorier utan strikt zonindelning och professionell utbildningspersonal kommer risken för nukleinsyraaerosolläckage att vara större, det falska positiva inträffar när läckage inträffar och som är extremt svårt att eliminera.

Dessutom är konstant temperaturförstärkning också mer benägen för icke-specifik förstärkning när provet är komplext (den relativa reaktionstemperaturen är lägre, och ju högre förlängningstemperatur, desto bättre primerbindningsspecificitet).

När det gäller den nuvarande tekniken är variabel temperaturförstärkning mer tillförlitlig.

5. Hur undviker man risken för läckage av nukleinsyraamplifieringsprodukter?
För närvarande väljer många tillverkare PCR-röret av körteltyp som nukleinsyrareaktionsröret, som är förseglat genom friktion, och temperaturdenatureringen i denatureringen med variabel temperatur i PCR-amplikationen med variabel temperatur når 90 grader
Celsius.Den upprepade processen av expansion med värme och kontraktion med kyla är en stor utmaning för tätningen av PCR-röret, och PCR-röret av körteltyp är relativt lätt att orsaka läckage.

Det är att föredra att använda reaktionen med ett helt förseglat kit/rör för att undvika läckage av reaktionsprodukten.Det skulle vara perfekt om det kunde finnas ett helt förseglat kit för nukleinsyraextraktion och detektion.

Så New Techs nya helautomatiska nukleinsyraextraktion och detektionsmaskin har ovanstående fem optimala val.